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    Implen小課堂:樣品吸光值和OD值有什么區(qū)別?

    在使用超微量分光光度計(jì)測(cè)量樣品時(shí),結(jié)果通常以吸光值顯示,并轉(zhuǎn)換為濃度結(jié)果。而在一些使用場(chǎng)景下,客戶習(xí)慣或需要用OD值表述結(jié)果,這兩個(gè)物理量看似是一樣的,都是對(duì)

    物質(zhì)吸光能力和吸光度的表征,但嚴(yán)格來(lái)講卻有一定的區(qū)別。


    先說(shuō)核心關(guān)系:

    吸光值 (Absorbance, A) ? OD值 (Optical Density, OD)

    您可以簡(jiǎn)單的理解為:所有的OD值都是吸光值,但并非所有的吸光值都叫OD值。


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    吸光值的定義


    定義: 根據(jù)朗伯-比爾定律,吸光值是一個(gè)無(wú)量綱的物理量,表示溶液對(duì)特定波長(zhǎng)光的吸收程度。

    計(jì)算公式: A = -log??(I / I?)

    吸光值與特定波長(zhǎng)相關(guān)聯(lián)。例如,在260nm處的吸光值表述為A???。吸光值的應(yīng)用非常廣泛: 用于測(cè)量清澈、均勻的溶液中某種特定溶質(zhì)的濃度。例如:測(cè)量DNA/RNA濃度(A???);測(cè)量蛋白質(zhì)濃度A???或各種標(biāo)準(zhǔn)曲線比色法;測(cè)量化學(xué)反應(yīng)的進(jìn)程,其理論基礎(chǔ)是溶質(zhì)分子對(duì)光子的吸收,以及由于非吸收導(dǎo)致的光衰減,其中就包括顆粒物的散射,以及氣泡的折射等。所以吸光值包括兩部分:真實(shí)的“”光值和其他因素導(dǎo)致的光衰減,由于檢測(cè)器本身無(wú)法進(jìn)行區(qū)分,都會(huì)顯示為吸光值結(jié)果。但儀器通常具備背景校正功能,可以對(duì)結(jié)果中的非吸收因素進(jìn)行一定程度的校正(可參考 320?340?核酸蛋白定量中背景校正的作用和選擇)。



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    OD值的定義



    定義: OD值是吸光值的一種,通常用來(lái)衡量渾濁樣品(如細(xì)菌細(xì)胞懸浮液、酵母培養(yǎng)液、顆粒物)對(duì)光的衰減程度。

    計(jì)算公式: 公式與吸光值完全相同:OD = -log??(I / I?)


    光的衰減機(jī)制: 在渾濁液中,光的減弱主要不是由分子吸收引起的,而是由散射引起的。細(xì)胞或顆粒將入射光向各個(gè)方向散射,導(dǎo)致探測(cè)器接收到的非散射光(透射光)強(qiáng)度減弱。OD值表述在微生物學(xué)中是常用的,OD600幾乎成為一個(gè)標(biāo)準(zhǔn)。選擇600nm是因?yàn)檫@個(gè)波長(zhǎng)的光不會(huì)被培養(yǎng)基中的常見(jiàn)組分(如LB培養(yǎng)基)顯著吸收,且對(duì)微生物的傷害較小。一些特殊的培養(yǎng)物也可用OD550、OD650等測(cè)量。而其他一些應(yīng)用,如對(duì)顆粒物的散射表征也使用OD450等,具體方法學(xué)的建立可參考文獻(xiàn)會(huì)進(jìn)行方法學(xué)開(kāi)發(fā)。


    圖片


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    為什么在表述中經(jīng)常混用?


    1. 測(cè)量?jī)x器相同: 兩者都是用分光光度計(jì)等儀器來(lái)測(cè)量的。

    2. 計(jì)算公式相同: 儀器內(nèi)部都是使用-log(I/I?) 這個(gè)公式來(lái)計(jì)算并顯示讀數(shù)。

    3.歷史習(xí)慣: 例如在微生物學(xué)領(lǐng)域,人們已經(jīng)習(xí)慣了使用“OD”這個(gè)詞,即使儀器屏幕上顯示的是“Abs”,大家也心照不宣地稱之為“OD值”。



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        當(dāng)您測(cè)量的是澄清的溶液,并想知道其中某種溶質(zhì)的濃度時(shí),您測(cè)得的是吸光值。當(dāng)您測(cè)量的是渾濁的細(xì)菌或細(xì)胞培養(yǎng)液、顆粒物懸濁液,并想估算細(xì)胞或顆粒物密度時(shí),您測(cè)得的是OD值。雖然在日常對(duì)話中混用可能不會(huì)引起誤解,但在嚴(yán)謹(jǐn)?shù)目茖W(xué)寫(xiě)作、報(bào)告或?qū)嶒?yàn)記錄中,使用準(zhǔn)確的術(shù)語(yǔ)是非常重要的。

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